Microscope smLigthsheet - Olympus SMLM - sPT - SPIM/ LSFM - TIRF/HILO


Ce système développé au laboratoire permet de combiner la microscopie à feuille de lumière à la microscopie de particule unique (SMLM, en mode PALM ou STORM). Il a été développé pour de l’imagerie bactérienne super-resolue en profondeur dans échantillons épais (études de biofilms)

SPIM / LSFM (Selective Plane Illumination Microscopy / Light-Sheet Fluorescence Microcopy)

Classiquement, l’imagerie de particule unique est faite en mode TIRF ou HILO pour réduire la profondeur de champ. Ce mode présente l’inconvéniant de se limiter à une distance de travail réduite. L’association SMLM, avec un éclairage en feuille de lumière nous permet de travailler sur une épaisseur allant jusqu’à 1 µm avec une résolution maximale de 50nm.

SMLM (Single Molecule Localization Microscopy)

L’imagerie à haute résolution, la nanoscopie, permet de dépasser les barrières physiques de la diffraction en atteignant une résolution latérale de 25 nm. Dans la microscopie de localisation par photoactivation (PALM :PhotoActivated Localization Microscopy) et la microscopie par reconstruction stochastique optique (STORM: Stochastic Optical Reconstruction Microscopy), quelques molécules sont activées, imagées, puis éteintes ou photoblanchies. Une image en deçà de la limite de diffraction est alors reconstruite après avoir déterminé avec une haute précision la position de toutes les molécules individuelles.

TIRF / HILO (Total Internal Reflection Fluorescence / Highly Inclined and Laminated Optical sheet)

L’imagerie TIRF consiste à illuminer à l’angle critique de réflexion, l’échantillon est alors exité par un phénomène d’ondes évanescentes sur les 40 premiers nanomètres. L’imagerie HILO ou pseudo-tirf est un dispositif d’illumination oblique (proche de l’angle critique) permettant une imagerie en champ large sur une profondeur de champ réduite qui baisse le bruit de fond généré par les plans hors focus. Ces modes d’imagerie peuvent être utilisés conventionnellement ou en SMLM.

Experts Scientifiques

Caractéristiques techniques

Modes d’acquisition

  • Microscopie en contraste de phase
  • Microscopie de Fluorescence à champ large
  • TIRF/HILO
  • SPIM / LS
  • LS- SMLM 
  • 3D LS SMLM

Statif

  • Olympus IX 71

Lasers
Banc laser mutalisé avec le microscope sPAINT (il ne peux être utilisé que sur un seul système à la fois)

  • 405 nm
  • 488 nm
  • 532 nm (150 mW specifique au SPIM)
  • 561 nm
  • 645 nm

Objectifs disponibles (Olympus)

  • 100X 1.49 Uapo N oil
  • 100X 1.4 ph3

Lightsheet

  • Lentille cylindrique

Camera

  • EMCCD (Andor IXon 888)  + Dual View (Photometrics DV2 Multichannel Imaging system)

Interface Logicielle

  • Micromanager


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